क्लासिक स्वाइन बुखार वायरस एंटीबॉडी एलिसा किट

विनिर्देश 10।

 

 

परीक्षण प्रक्रिया एवं व्याख्या

 

चरण 1 परीक्षण प्रक्रिया

1.1 धो घोल तैयारी

Wओर्किंग सांद्रता 10। wअशिंग तरल : 10।उपयोग सं पहिले धोनाय कें घोल कें कमरा कें तापमान (20-25 डिग्री ) पर बहाल कैल जैबाक चाही आ समान रूप सं हिलनाय कें लेल एकरा एक समान बनावा कें चाही. तखन शुद्ध जल सं 20 गुना गाढ़ा धोएय कें घोल (उदाहरण कें लेल, 5ml गाढ़ा धोनाय कें घोल कें 95ml शुद्ध जल मे मिलाएल जायत छै), नीक सं मिलाऊं, आ पतला धोनाय कें तरल पदार्थ कें 7 दिन तइक 2-8 डिग्री पर संग्रहित कैल जा सकएय छै.

१.२ नमूना तैयारी २.

1 पूरा पशु खून लेल गेल, 10 मिनट धरि 4000rpm पर अपकेंद्रित्रित कयल गेल, आ सुपरनेटेंट एकत्रित कयल गेल। सीरम कें बिना हेमोलिसिस कें प्राकृतिक रूप सं जमनी सेहो कैल जा सकय छै.

1 सीरम पतलापन प्लेट मे 10 बेर परीक्षण करय वाला सीरम कें पतला करूं (उदाहरण कें लेल:135ul नमूना पतला करय वाला कें परीक्षण करय कें लेल सीरम कें 15ul जोड़ूं)।

नोट: नकारात्मक आ सकारात्मक नियंत्रण कें पतला करय कें जरूरत नहि छै.

१.३ परीक्षण प्रक्रिया २.

2 एंजाइम लेबल माइक्रोप्लेट (नमूना के संख्या के अनुसार, अलग करलऽ जाय सकै छै आरू कई बार प्रयोग करलऽ जाय सकै छै), एंजाइम लेबल माइक्रोप्लेट म॑ पतला सीरम के 100ul जोड़ै छै, नकारात्मक नियंत्रण आरू सकारात्मक नियंत्रण के लेलऽ दू-दू कुँआ सेट करै छै, आरू क्रमशः प्रतिक्रिया म॑ 100ul जोड़ै छै । धीरे-धीरे नमूना कें इनार मे हिलाऊं, प्लेट कें ढकय कें लेल सीलिंग प्लेट फिल्म कें उपयोग करूं, आ 37 डिग्री पर 30 मिनट कें लेल इन्क्यूबेशन करूं.

2 सीलिंग प्लेट फिल्म खोलू, प्लेट मे घोल कें हिलाऊं, प्रत्येक कुआं मे 300μl वर्किंग एकाग्रता धोनाय कें तरल पदार्थ कें धोनाय, आ ओकर बाद कुआं मे तरल पदार्थ कें फेंक दिअ. उपरोक्त चरण 5 बेर दोहराउ, आ अंत मे एकटा साफ शोषक कागज पर थपथपाउ।

3 प्रत्येक कुआँ मे 100μl एंजाइम संयुग्मित करू, प्लेट के ढक दियौ, आ 37 डिग्री पर 30 मिनट धरि इन्क्यूबेट करू।

1 सीलिंग प्लेट फिल्म खोलू, प्लेट कुआँ मे घोल निकालू, प्रत्येक कुआँ मे 300μl वर्किंग एकाग्रता धोना तरल पदार्थ मिला दियौ, आ फेर कुआँ मे तरल पदार्थ के फेंक दियौ । उपरोक्त चरण 5 बेर दोहराउ, आ अंत मे एकटा साफ शोषक कागज पर थपथपाउ।

2 प्रत्येक कुआँ मे 100μl सब्सट्रेट घोल जोड़ू, प्लेट के ढक दियौ आ प्रकाश सँ 37 डिग्री दूर 10 मिनट धरि इन्क्यूबेट करू।

1 प्रत्येक कुआँ मे 50μl स्टॉप घोल जोड़ू, आ 5 मिनट के भीतर परिणाम निर्धारित करू।

 

चरण 2 परिणाम व्याख्या

प्रत्येक कुआँ के ओडी450 मान 96-वेल माइक्रोप्लेट रीडर पर पढ़ल गेल।

२.१ सत्यापन २.

नकारात्मक नियंत्रण केरऽ औसत od450nm मान < 0.2 छेलै आरू सकारात्मक नियंत्रण केरऽ औसत od450nm मान 0.7 स॑ अधिक या बराबर छेलै, प्रयोगात्मक परिणाम मान्य छेलै । नहि त परीक्षण दोहराबय के चाही.

2.2 गणना पद्धति 1.1.

प्रत्येक नमूना कें लेल, सही नमूना आ नियंत्रण मान कें उपयोग करयत एस/ पी कें निम्नलिखित रूप सं गणना करूं:

२.३ परिणाम व्याख्या २.

जखन S/P < 0.2, एकरा नकारात्मक मानल जाइत अछि |

जखन S/P > 0.3 तखन एकरा सकारात्मक मानल जाइत अछि |

जखन 0.2 0.3 सं कम या बराबर S/P सं कम या बराबर होयत छै, तखन एकरा संदिग्ध मानल जायत छै, आ एक सप्ताह बाद नमूनाकरण आ परीक्षण कें दोहरानाय कें सुझाव देयत छै.

 

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